近年来,组学技术的迅速进展为科研工作者在生物医疗研究中的机制探索提供了重要工具。生物体特征的表达受诸多复杂生命活动的影响,包括基因突变、基因表达水平、蛋白质翻译后修饰等多重因素。转录组能够反映细胞或组织在特定生物过程中的活跃基因表达情况,是基因组与蛋白组之间的关键桥梁。与转录组相比,蛋白组更接近于生物体的实际功能状态,因为蛋白质在生命功能的执行中占据了重要地位。转录组学捕捉的是基因的瞬时活动,而蛋白组学则展示了基因的最终产物。
随着高通量测序技术的发展,转录组学已成为机制研究的优先选择。通过RNA-seq进行基因表达分析,在推动相关分子机制研究方面发挥了积极作用。然而,mRNA的表达并不能完全反映蛋白质水平,RNA在翻译过程中常受到翻译调控及RNA修饰等多种生物过程的影响,常常导致转录与蛋白表达之间存在差异。高分辨质谱仪的升级使蛋白质组学成为阐明细胞功能和分子机制的有力工具,联合分析在高影响力文章中愈加普遍。
基于转录组和蛋白组的数据,研究者可以全面、系统地探讨基因表达和蛋白调控之间的相互作用。联合分析不仅可以研究基因的初始表达对蛋白合成的影响,还可以深入挖掘基因表达产物对基因表达的反调控作用,从而深入解析其中复杂的分子关系。
转录组与蛋白组联合研究方案
分析内容包括:
- 转录组测序:
- 差异基因火山图:展示样品间差异基因的显著性。
- 差异基因热图:直观展现不同样本或分组基因表达量的变化。
- 富集分析气泡图:有助于将基因归类,从而更好地理解基因的背景信息。
- 富集通路的GSEA分析:关注基因整体表达趋势,展现某一功能单元的调节作用。
- KEGG网络图:展示通路与基因之间的关系,便于全局了解它们的联系。
- 蛋白组分析:
- 差异蛋白柱状图:展示不同处理组合下差异蛋白的上下调情况。
- 差异蛋白质韦恩图:呈现整体蛋白的差异情况。
- 富集分析气泡图:展示不同处理下差异蛋白的功能情况。
- PPI蛋白互作网络:从蛋白质组的角度揭示差异表达蛋白的变化趋势,寻找关键节点。
- 联合分析:
- 基于富集通路进行共表达分析:筛选在不同组学水平上都显著富集的通路进行研究。
- 基于调控网络挖掘关键调控物质:探索不同物质间的直接或间接调控关系,并根据网络中的连接程度筛选关键调控物质。
- 基于相关性分析:筛选在转录与蛋白水平之间共表达的基因/蛋白质,进一步挑选候选基因/蛋白质进行验证。
研究案例
以下分享两个来自不同领域的转录组与蛋白组联合研究案例,展示如何利用分析方案撰写高影响力文章。
案例一:转录组与蛋白质组联合研究在胚胎神经母细胞瘤中的应用
该研究探讨了环境线索在神经母细胞瘤模型中转移触发因素的作用。通过对胚胎交感神经节和背根神经节培养基对神经母细胞的影响进行分析,研究发现细胞间黏附、迁移及基因表达发生显著变化。转录组分析显示条件培养基能显著上调细胞粘附及迁移相关基因的表达,蛋白组学分析则鉴定出多种与细胞运动相关的蛋白。联合分析结果表明蛋白OLFM1通过其受体介导了神经母细胞的迁移能力,推动了转移机制的理解。
案例二:低温对大蒜变绿的调控机制研究
该研究通过转录组和蛋白组的比较,揭示了低温储藏对大蒜变绿的影响。研究表明,在4°C和30°C下储藏的大蒜样本中,基因表达水平存在显著差异。蛋白质组学分析鉴定出近15000个蛋白,并挖掘出多个关键通路参与低温调控大蒜绿化。关键基因的qPCR验证进一步支持了通路分析的结果。
总体而言,蛋白质组学为研究转录组与基因组学提供了重要补充,两者的联合分析有助于揭示基因表达与功能层面的复杂关系,准确定位功能基因或蛋白,并探讨其相互作用网络。选择尊龙凯时人生就博作为科研合作伙伴,能够更精确地推动生物医疗领域的持续进步与创新。
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